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Clarity OTX 寡核苷酸净化

Clarity OTX


15 分钟即可从生物样本中快速分离寡核苷酸药物

使用 Clarity OTX 固相萃取 (SPE) 和缓冲液产品,在更短的时间内从生物体液和组织中分离基于 RNA 和 DNA 的治疗药物/代谢物。

  • 典型萃取回收率大于 80 %
  • 无需液液萃取 (LLE)
  • 针对 LC-MS 生物分析进行优化

美国专利号 7,119,145

推荐用途

从生物体液和组织中提取基于 RNA 和 DNA 的治疗剂/代谢物

Clarity OTX 寡核苷酸净化

一般萃取


常见提取程序(~180 分钟)

适用于大多数寡核苷酸治疗药物和样品

Oligo types Sample Types
DNA Plasma
Aptamers Serum
RNAi/siRNA Urine
Thioates Tears
Lipid-conjugates Saliva
Liposome
encapsulated
Tissue

提取实验方案


Sample Pre-Treatment
Tissue
  • Proteinase K digestion or homogenize
  • Mix 1-to-5 with Lysis-loading buffer
Biological Fluids
  • Mix 1-to-1 with Lysis-Loading buffer

检测低剂量水平


由于母体寡核苷酸治疗剂及其代谢物的典型回收率为 80% 或更高,因此可以在皮摩尔范围内进行检测。下面的 TIC 说明了在这个非常敏感的范围内检测剂量。使用 Clarity OTX 提取加标到血浆中的 500 ng 和 50 ng 等分试样,以确定灵敏度限值。500 ng 起始量的 TIC 如下所示。可以定量对应于 19 mer P-S 的 14.3 分钟峰。虽然在 50 ng 上样量的 TIC 中没有观察到峰,但在 m/z 为 944(-7 电荷态)处使用 XIC,仍然可以定量非常低水平的寡核苷酸。

血浆中的灵敏度研究

Column:
Clarity 3 µm Oligo-RP C18
Dimension:
50 x 4.6 mm
Part No.:
00B-4441-E0
Mobile Phase:
A: 50 mM TEAA, pH 7.5 / 5 % Acetonitrile
B: Methanol
Gradient:
A/B (90:10) to A/B (40:60) in 20 min
Flow Rate:
1 mL/ min
Detection:
UV @ 260 nm
Sample:
25nt DNA oligonucleotide

使用 Clarity OTX 从肝组织中提取的寡核苷酸的 UV 色谱图。分析前,将 19 聚体提取的硫代磷酸酯寡核苷酸加入 10 μg 寡核苷酸内标。顶部两张色谱图代表孵育的 P-S 寡核苷酸的不同水平。底部色谱图是等量 19 聚体寡核苷酸和内标的外标。请注意,孵育样品中寡核苷酸的回收率高,血浆污染物含量低。

肝脏组织的灵敏度研究

MS 灵敏度水平与 MS 仪器和所使用的 HPLC 流动相高度相关。有关使用 Clarity OTX 在具有特定流动相的各种仪器上实现的灵敏度水平的问题,请联系 Phenomenex。