司美格鲁肽与卡格列肽复方制剂的肽类杂质谱分离策略

一、应用背景：复方减重肽类带来的分析复杂性

随着代谢类疾病治疗策略的演进，由卡格列肽（Cagrilintide，长效胰淀素类似物）与司美格鲁肽（Semaglutide，GLP-1 受体激动剂）组成的复方制剂在体重管理领域逐渐受到关注。此类复方肽药物在临床疗效提升的同时，也对分析检测提出了更高要求。

从分析角度看，肽类药物的结构相似性高、分子量较大，其杂质谱通常同时包含：

D-氨基酸异构体
肽链断裂产物
氧化或还原形式
脱酰胺、磷酸化、酰基化等翻译后或化学修饰体

当两种结构相近的长肽组合于同一制剂中时，其相关物质之间的共洗脱风险明显增加。针对司美格鲁肽与卡格列肽复方制剂，建立一套系统化、可重复、适用于质量控制的 RP-HPLC 分离方案成为关键技术任务。

二、色谱分离需求与柱技术选择逻辑

肽类分子的有效分离不仅依赖梯度与流动相体系，更与固定相结构密切相关。针对 20 个氨基酸残基以上的中长链肽，常规 C18 固定相在空间位阻与传质效率方面可能存在局限。

在本研究中，选用飞诺美（Phenomenex）Aeris? Peptide XB-C18 色谱柱作为核心分离组件，其设计特征与肽类分离需求形成明确对应关系：

空间效应优化的 C18 固定相

Aeris? Peptide XB-C18 通过在固定相中引入异丁基侧链，增加 C18 配体之间的平均间距，降低长肽在孔道内的空间排斥效应，更有利于中长链肽的进入与充分相互作用。

实心核-壳层（Core-Shell）颗粒结构

飞诺美（Phenomenex）Aeris? Peptide 系列采用核-壳结构颗粒，缩短传质路径，在标准 HPLC 条件下获得更窄峰宽与更稳定的峰形，对复杂肽类杂质的分离尤为关键。

上述固定相设计使 Aeris Peptide XB-C18 在肽类及其相关杂质分析中具有良好的适用性。

三、分析方案设计：从含量测定到有关物质分析

1. 含量测定 (Assay) 应用

在司美格鲁肽与卡格列肽复方制剂的含量测定中，研究基于飞诺美 (Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18色谱柱建立了快速梯度反相HPLC 分离方案。

分离表现： 在该色谱柱上，司美格鲁肽与卡格列肽主峰及其各自杂质均实现了分离度大于1.5的有效分离，满足含量测定中对峰分离的基本要求。
系统一致性： 通过6次重复进样，主峰的保留时间与峰面积保持高度一致，表明在该应用条件下, Aeris Peptide XB-C18色谱柱具备良好的系统稳定性和可重复性。

该结果支持飞诺美 (Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18 在复方肽制剂常规含量分析中的可用性。

2. 有关物质 (Related Substances) 分析应用

针对复方肽中复杂杂质谱的全面解析，研究进一步对梯度条件进行了延展与细化，将总运行时间延长至 120分钟，以提升杂质分离度。

杂质分离能力： 在优化条件下, 飞诺美 (Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18 色谱柱成功分离了：
- 卡格列肽的 10个未知杂质峰
- 司美格鲁肽的8种相关物质,其中包括 D-His、D-Phe、D-Ser等氨基酸构型异构体
定量可用性： 所有杂质峰与对应主峰之间的分离度均满足定量分析需求；相关峰面积的 RSD均小于 5%，体现出在长梯度条件下依然保持的定量精度。

这些结果表明, 基于飞诺美(Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18的 RP-HPLC分离方案，能够覆盖从结构异构体到未知相关物质的多类型肽类杂质。

Standard and Impurity Standard Preparation

Standard solution: 0.5mg/mL of Semaglutide and Cagrilintide in Diluent
Impurity standards: 1.0 mg/mL in Diluent
Spiked sample: 0.5% of each impurity spiked in Semaglutide and Cagrilintide standard with respect to 0.5mg/mL test concentration.
Analytes: The API and impurities were purchased locally from ManoTri Pharma Pvt Itd, and Life Technologies (India) Pvt. Ltd

No.	Analyte	IUPAC (Sequence)
1	Semaglutide	H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala- Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
2	D-His(1)- Semaglutide	D-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala- Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
3	D-Phe(6)- Semaglutide	H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-D-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala- Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu- Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
4	D-Ser (8)- Semaglutide	H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-D-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala- Ala-Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-OH
5	(3-31)- Semaglutide	H-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys (AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
6	Des side chain- Semaglutide	H-His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala- Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
7	(3-31) linear- Semaglutide	H-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys- Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH
8	D-Ser(11)- Semaglutide	H-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-D-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala- Lys(AEEAc-AEEAc-γ-Glu-carboxy heptadecanoyl)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-OH

色谱条件

四、应用价值与质量控制适配性

本文所述分析策略是针对司美格鲁肽与卡格列肽复方制剂建立的反相HPLC分离方案。该方案在保持实验条件可控的前提下，展示了以下应用特征：

适用于复方肽制剂中结构相近主药与杂质的系统分离
在含量测定与有关物质分析两个层面均表现出稳定重现性
可用于研发阶段的方法建立，也可迁移至后续的常规质量控制场景

在这一过程中, 飞诺美(Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18 色谱柱作为核心分离组件，发挥了关键作用。

结语

针对司美格鲁肽与卡格列肽复方制剂中复杂的肽类杂质谱，本研究展示了一套基于反相HPLC 的可执行分离策略。通过采用飞诺美(Phenomenex) Aeris Peptide XB-C18色谱柱并结合合理的梯度设计，该方案在分离度、重现性与定量适用性方面表现稳定，可作为复杂肽类复方制剂分析中的参考路径。

技术专栏