常见问题解答-飞诺美

将载气从氢气改为氦气会改变强极性化合物的离子比率。这可以从以下方面观察到： ?极性化合物响应因子的相对标准偏差百分比（% RSD）增加（大于 15%） ?极性化合物的校准曲线出现非线性这可能是由于使用氢气作为载气时，极性化合物在离子源中发生了潜在的反应所致。

柱流失是固定相的损失。色谱柱固定相是由重复基团构成的长聚合物链，这些聚合物还会与其他聚合物链交联，这种交联作用有助于稳定固定相并减少流失量。在链的末端通常存在更具反应性的基团，如醇基（聚乙二醇相）或硅醇基（硅氧烷相）。这种活性较高的基团可能与链中的前一个连接点发生反应，导致聚合物链的某一部分断裂并作为流失物被洗脱出来。随着温度升高，该反应速率加快，导致流失增加，这就是为什么基线会随柱温升高而上升。其他因素也可能引发固定相中的这种反应。强酸、强碱和氧气等强反应性物质会破坏这些聚合物链并导致流失。如果注入

硅胶表面的正电荷会排斥带正电荷的分析物，这阻止了碱性氮基团与未带电的硅醇基发生离子相互作用（这种相互作用会导致峰拖尾）。

当色谱柱被污染的样品弄脏时，可以使用溶剂冲洗法。该方法在分析惰性化合物或在新柱上峰形良好的化合物时最为有效。操作步骤通常相当简单 —— 从气相色谱仪上卸下色谱柱后，使用氮气或氦气等惰性气体将几倍柱体积的溶剂压入色谱柱。溶剂从色谱柱的后端（检测器端）向前端（进样器端）推动，这样污染物就不会被进一步推到色谱柱内部。如果使用多种溶剂，要确保与前一步使用的溶剂没有混溶性问题。冲洗较厚液膜的色谱柱时也要小心 —— 二氯甲烷、乙酸乙酯或己烷等高非极性溶剂会导致聚合物溶胀，从而阻塞色谱柱的流动通道。典型的操作程序包

通常串联使用不同孔径的色谱柱来分离分子量差异大的聚合物。传统建议按孔径递增顺序排列（最小孔径柱最靠近进样器），但实际上只要保持分析一致性，顺序影响不大。另一种选择是使用含多孔径颗粒的混合/线性柱，其优势是单柱即可实现充分分离。使用较少色谱柱可减少流动相中的分析物扩散，获得更尖锐的峰形和更高灵敏度。但对于分子量相近（差异<30%）的聚合物，仍需多柱串联提供的额外理论塔板数来实现分离。

ROA色谱柱通常用于分离发酵分析中常见的糖和有机酸混合物，采用独特流动相(通常为0.005N H2SO4)来分离糖和淀粉以及有机物酸和醇；这些参数都是监控发酵过程的关键。

从正相转为极性有机相/反相时：用甲醇:乙醇=9:1(V/V)过渡溶剂以0.5mL/min流速冲洗至少10个柱体积（250×4.6mm柱需25mL，150×4.6mm柱需15mL），再用新流动相平衡至少10个柱体积。若反相缓冲盐不溶于甲醇/乙醇，需先用水短暂冲洗。不建议从反相转回（切回）正相模式。

当将样品加入沉淀溶剂时，必须确保样品与溶剂充分混合。建议用有机溶剂反复吹吸样品以确保完全混匀。样品浑浊表明沉淀物在通过滤膜前未完全形成。

在SPE方法开发过程中，建议收集所有馏分以帮助进行方法优化和故障排除。可能导致回收率偏低的常见原因包括： ? 上样步骤损失：上样量过大、上样溶剂洗脱力过强、上样流速过快（导致分析物与吸附剂相互作用时间不足） ? 洗涤步骤损失：吸附剂选择不当（保留能力不足）、洗涤溶剂洗脱力过强 ? 分析物吸附过强：洗脱溶剂强度不足、吸附剂选择不当（如不可逆结合）、洗脱溶剂选择错误（如分析物溶解性问题）、残留洗涤溶剂稀释洗脱强度（洗涤后柱体干燥不充分） ? 分析物降解：需检查分析物稳定性及其对pH值、光照、温度等因素的敏感

配制1L 5mM碳酸氢铵溶液，少量浓氨水即可调至pH9。要达到pH11，预计需添加溶液总体积5 10%的浓氨水（如1L溶液需加50 100mL）。

常见问题解答

在气相色谱 质谱联用（GC/MS）中，将载气从氦气改为氢气是否会改变强极性化合物的离子比率

什么是气相色谱柱流失？

为什么Luna Omega PS C18色谱柱能为碱性化合物提供更好的峰形？

我应该如何以及何时用溶剂冲洗气相色谱柱？

如何最佳分离分子量范围很宽的聚合物？

我应该使用什么Rezex色谱柱进行发酵分析？

如何对Lux色谱柱进行溶剂转换？

我按照Impact方法操作，但样品浑浊，哪里出错了？

我正在开发SPE方法但观察到分析物回收率偏低，该如何解决？

配制Lux AMP流动相时，需多少氨水将5mM碳酸氢铵溶液调至pH11？