常见问题解答-飞诺美

清洗流程取决于分离模式。开始前需确保柱内溶剂/流动相与清洗溶剂互溶，并使用正常流速的1/5 1/2进行清洗。柱体积计算公式：V=πr2L（V=体积/mL；r=柱半径/cm；L=柱长/cm）。具体清洗方案：正相模式： ? 依次用10倍柱体积冲洗：氯仿→异丙醇→二氯甲烷→流动相反相模式： ? 依次用10倍柱体积冲洗：95%水/5%乙腈（去除缓冲盐）→THF→95%乙腈/5%水→流动相 HILIC或离子交换模式*： ? 依次用10倍柱体积冲洗：50/50有机相(乙腈或甲醇)/20mM pH10碳酸氢铵

通常具有极性选择性的色谱柱（如Synergi Fusion RP或Kinetex Biphenyl）能很好地用于LC MS/MS农药/除草剂筛查。

较薄液膜：提供更高的分离度和更快的分析速度，但样品容量有限。较厚液膜：具有更高的样品容量，但分离度较低，通常用于分析高挥发性分析物。

retention gap和guard column都是内表面未涂覆色谱相的熔融石英毛细管： ? 在分流进样模式下，guard column可截留样品中的非挥发性或弱挥发性化合物，防止污染分析柱 ? 在不分流模式下，retention gap能使进样溶剂和分析物冷凝，程序升温时溶剂汽化排出，而分析物聚焦在分析柱前端两者物理结构相同，仅因用途不同而命名不同。

所有13mm和25mm Phenex过滤器仅能使用10cc/10mL以上的注射器。较小注射器可能压力过大导致滤膜破裂。非无菌4mm装置可承受更高压力（最高200psig），因此可使用小至5mL的注射器。

所有样品必须进行过滤，尤其是发酵样品。如果处理特别复杂的样品，还应考虑使用非保留型固相萃取（SPE）。如果希望延长 Rezex 色谱柱的使用寿命，建议使用SecurityGuard 保护柱。流动相同样需要过滤，以延长色谱柱寿命。

这很大程度上取决于分析物特性。如果分析物在HPLC方法中保留良好，通常可直接进样而无问题。若分析物在运行早期洗脱，则可能需要在分析前用水或缓冲液稀释样品，以降低进样溶剂的洗脱强度。

推荐使用12 18聚体的poly dT ladder作为标准品，该标准品是合成寡核苷酸方法开发的常用参照物。

GPC样品溶剂通常应能完全溶解样品，因此一般无需清洁色谱柱。但若确认色谱柱被污染，首先需确定样品中可能残留的组分，然后选择能溶解该污染物的溶剂进行清洗。注意所选溶剂需与当前流动相互溶，且两种溶剂对填料的溶胀程度相近。若溶胀差异不大且溶剂互溶，可用清洗溶剂冲洗20个柱体积，再恢复方法流动相。

选择溶剂需要考虑的因素是溶解度。您的分析物可溶于什么溶剂？这将决定您使用什么流动相进行分析，因为您的分析物必须可溶于流动相中才能被色谱柱分离。有时，分析物的分离度差或回收率低可能是由于分析物在选定流动相中的溶解度不佳导致的。

常见问题解答

Luna NH2色谱柱的推荐清洗流程是什么？

我想将农药分析方法从GC MS转为LC MS，有什么建议？

膜厚如何影响分离度和色谱柱容量？

retention gap和guard column有何区别？

Phenex针式过滤器可与任何注射器搭配使用吗

Rezex样品上机前需要前处理吗？

能否将Phree磷脂去除板/管中的样品直接进样到反相LC色谱柱？是否会产生问题？

用于寡核苷酸LC/MS方法开发的可接受标准品是什么？

如何清洁再生GPC色谱柱？

使用Phenogel进行分离时，应该使用什么溶剂？